BIOSENTSORE dinamikoak heliX cyto Laborategiko analisi sistema guztiz automatizatua

Zehaztapenak

• Produktuaren izena: heliX zito
• Fabrikatzailea: Dynamic Biosensors GmbH
• Bertsioa: 1.0

Produktuaren informazioa

• HeliX cyto sistema zelula bakarreko interakzio-zitometriarako (scIC) diseinatuta dago, molekulen gainazaleko jomugekin fluoreszenteki markatutako lotura-zinetika neurtzeko, denbora-bereizmenezko moduan.

Produktuak erabiltzeko jarraibideak

HeliXcyto txipa erabiliz

• HeliXcyto txipak zelulak harrapatzeko eta neurtzeko elektrodo-puntuekin mikrofluido-kanal bakarra dauka. Ziurtatu txiparen kokapen egokia eta jarraitu zelulak harrapatzeko argibideak.

Mantentze-txipa

• Erabili Mantentze-Txipa garbiketa, probak eta mantentze-lanetarako soilik. Saihestu esperimentuetarako erabiltzea kutsadura saihesteko.

Buffer exekutatzen

• Erabili Running Buffer 1 (RB 1) neurketetan zehar. Informazio zehatza lortzeko, jo scIC bateragarritasun orrira gida nagusira.

Sentsore-gramaren analisia

• Neurketak egiten diren bitartean, sentsorea denbora errealean monitorizatu heliOS softwarean. Aztertu fluoreszentzia-erantzuna denboran zehar tasa zinetikoak ateratzeko.

Pasibazioa

• Kontuan hartu pasibazioa erabiltzea analitoen adsorzioa saihesteko urrats aukerako gisa, pasibazio-erreaktibo bat txipean inkubatuz.

Normalizazioa

• Normalizazioa datuak alderatzeko eta aztertzeko estandarizatzeko prozesu bat da. Jarraitu erabiltzailearen eskuliburuan adierazitako normalizazio prozedurak.

SARRERA

• Gida hau laburpen gisa pentsatuta dagoview heliXcyto sistemaren eta bere gaitasunen berri. Kapitulu guztiak heliXcyto gida nagusian azaltzen dira, hemen: https://www.dynamic-biosensors.com/helios-download-latest/

heliXcyto Terminologia zelula bakarreko interakzio-zitometria

• Zelula bakarreko interakzio-zitometria (scIC) molekula fluoreszenteki markatu baten (analito) zelula-gainazaleko diana bati (ligandoari) lotura-zinetika neurtzen duen teknologia bat da, denbora-bereizmenezko seinale fluoreszentea grabatuz.

Analita

• Analitoa fase mugikor batean dagoen molekula fluoreszenteki markatua da, zelula baten gainazalean dagoen diana bati lotu daitekeena.

Ligandoa

• "Ligandoa" heliOS softwarean erabiltzen den izena da analito batek zelula-gainazalean lotu daitekeen jomuga deskribatzeko. Hau hartzaile-molekula bat, lipido bat, azukre bat edo beste zelula-gainazaleko molekula bat izan daiteke.

Zelula-tranpa

• Zelula-tranpak heliXcyto txip batean dauden polimero kaiola biobateragarriak eta fluxuarekiko iragazkorrak dira. 6 eta 25 µm arteko tamaina desberdineko zelulak fluxu-kanalean harrapatzeko eta immobilizatzeko diseinatuta daude. Zelula-tranpak 3 tamaina ezberdinetan daude eskuragarri: txikia, ertaina eta handia.

heliXcyto txipa

• heliXcyto txipek alde bakoitzean irekidurak dituen mikrofluido-kanal bakarra dute. Bi elektrodo-puntu urreztatu daude kanalaren erdian.
• Puntu batek erreferentzia puntu gisa balio du, eta bigarren puntuak zelulak harrapatzeko 3D polimero biobateragarriak dituen kaiola dauka eta neurketa puntu gisa balio du. Neurketa puntuak mota bereko 1 edo 5 tranpa izan ditzake.
• Erreferentzia puntuak bildutako fluoreszentzia-seinalea denbora errealean erreferentziatzea ahalbidetzen du. HeliXcyto txipa berrerabilgarria eta botatzekoa da.

Mantentze-txipa

• Mantentze-txipa garbiketa, probak eta mantentze-eragiketa guztietarako erabiltzen den kanal bakarreko txipa mikrofluidiko bat da.
• Eragiketa hauek honako hauek dira: Garbitu eta Lo egin errutina, Esnatu eta Leheneratze errutina, Sistemaren garbiketa eta Fluidoen proba. Txip hau ez da erabili behar zelula/proteina soluzioekin egindako benetako esperimentuetarako, txiparen kutsadura gehiago saihesteko.

Buffer exekutatzen

• Neurketan zehar heliXcyto-n erabiltzen den bufferra da martxan dagoen bufferra. Oro har, 1. martxan dagoen bufferra (RB 1) erabiltzea gomendatzen da.
• Informazio gehiago lortzeko, jo gida nagusian dagoen scIC bateragarritasun orrira.

Sentsoregrama

• scIC sentsograma bat segundoko zenbaketa (cps) denboran zeharreko fluoreszentzia erantzunaren grafikoa da, zelulen gaineko edo zelulen barneko interakzio baten progresioa ilustratzen duena. Kurba hau erabil daiteke viewNeurketa egiten ari den bitartean, denbora errealean heliOS-en editatua.
• Sentsoregramak aztertzerakoan, behatutako fluoreszentzia-arrastoetara egokitzen den esponentzial egokiena zehazten da eta tasa zinetikoak (kon, koff) ateratzen dira.

Pasibazioa

• Pasibazioa proban zeharreko urrats aukerakoa da, non pasibazio-erreaktibo bat txipan injektatzen den eta gainazalak blokeatzeko inkubatzen den. Horrek analitoen txiparen materialetan adsorzioa saihesten lagun dezake.

Normalizazioa

• Normalizazio-urrats bat erabiltzen da neurketa-puntu bakoitzetik seinalea detektagailu bereizi batek biltzeagatik seinaleetan dauden desberdintasun txikiak kontuan hartzeko. Kontzentrazio definitu bateko koloratzaile fluoreszente bat (analitoaren kontzentrazio altuenean eta analitoaren etiketatze-mailan oinarrituta) injektatzen da analisi baten hasieran. Normalizazio-urrats hau automatikoki sartzen da neurketa-metodoan, eta neurtutako normalizazio-pikoa erabiltzen da detektagailuen arteko desberdintasunak automatikoki zuzentzeko datuen analisian, denbora errealeko erreferentzia egin aurretik.

sciC Neurketa Printzipioak

sciIC aplikazioak

• Zelula bakarreko interakzio-zitometriak (scIC) analito fluoreszenteki markatu baten bere jomugari zuzenean zelula bizidunetan lotzen eta askatzen denean duen tasa zinetikoak eta afinitatea neurtzen ditu.
• scIC-n analitoen detekzioa tamainarekiko independentea da eta, beraz, edozein molekularentzat da garrantzitsua, nm azpitik > 100 nm-ra arte, eta molekula klase guztientzat ere garrantzitsua da, molekula txikietatik, peptidoetatik, aptameroetatik, nanogorputzetatik, afigorputzetatik, antigorputzetatik, antigorputz biespezifikoen formatuetatik, proteinetatik, proteina konplexuetaraino, besikula (exosomak), lipido nanopartikulak eta birusetaraino.

scIC teknologiak aplikazio-eremu hauek jorratu ditzake:

• seinalearen neurketa amplotzeko pantailetan dauden mailak
• Kon eta Koff tasen analisi zinetikoa
• Afinitatearen eta abiditatearen ebaluazioa Koff eta doikuntza bifasikoen ereduen bidez
• espezifikotasun probak
• Zelula gainazaleko mintz-proteinen kuantifikazio erlatiboa
• epitopoen sailkapena eta lehiaketa azterketak
• inhibizio-analisiak
• proteina zuzenduen barneratzearen ebaluazioa

heliXcyto Hardware Gaitasunak

Sistema fluidikoa

• HeliXcytoren sistema fluidikoa 3 buffer botila ezberdinek elikatzen dute, funtzionamendu eta mantentze-lanen bufferra aldatzea ahalbidetuz. HeliXcytoren ponpak 20 eta 500 µL/min arteko emari-tasetara ezar daitezke, egoera desberdinetara egokituz.ample eta analisi-eskakizunak. Txip-aren fluxu-kanala bi irekiduraren bidez konektatzen da sistema fluidikora. Ezkerreko irekidura s-ra konektatuta dago.ample, buffer eta garbiketa hodiak, eskuineko irekidura birsorkuntza hodiarekin lotuta dagoen bitartean.
• Bi norabideko fluido-sistema honek zelulak modu egonkorrean harrapatzea ahalbidetzen du neurketa baten urrats desberdinak egiten diren bitartean, eta, azkenean, txiparen birsorkuntza saiakuntzan bertan berrerabiltzeko.
• 1. irudia. Txip integrazioa sistema fluidikoetan

Sistema Optikoa

• Fluoreszentzia-seinalea diodo igorle (LED) gorri eta berdeek kitzikatzen dute eta lau fotoi bakarreko kontagailuk detektatzen dute, eta hauek kanalaren sakonera osoan zehar puntu bakoitzetik seinale gorriak eta berdeak biltzen dituzte.
• Bi seinale independente aldi berean monitoriza daitezke neurketa-puntu berean, bi interakzio aldi berean neurtzeko aukera emanez bi koloreko analisi-konfigurazio batean.
• 2. irudia. Optikaren konfigurazioa
• Neurketa-puntu bakoitzetik seinaleak biltzea detektagailu bereizi batek kudeatzen du, eta horrek desberdintasun txikiak sor ditzake zenbaketa gordinetan. Hori kontuan hartzeko, normalizazio-urrats bat automatikoki sartzen da datuak sortzeko analisietan.
• Fotoi bakarreko kontagailuez gain, tresnak CCD kamera eta islatutako argi mikroskopio bat ditu. Tresna hauek zelulen irudiak denbora errealean ateratzeko aukera ematen dute, zelulen osotasuna eta analitoen kalitatea neurketa osoan zehar ebaluatzeko aukera emanez.
• Konfigurazio konbinatu honek elkarrekintzak eta baldintza biologikoak kontrolatzen direla bermatzen du, esperimentuaren ebaluazio osoa eskainiz.

sciC lan-fluxua

scIC neurketa prozesua 3 urrats nagusitan bana daiteke

1. Diseinu esperimentala heliOS-en: Neurketa bakoitza heliOS softwarean esperimentua diseinatzearekin hasten da. Saiakuntza-lan-fluxua aurrez definitutako metodoak hautatuz eta parametro esperimentalak doituz konfiguratzen da, hala nola erabilitako zelula-lerroa, analitoen kontzentrazioa eta buffer-baldintzak. HeliOSek automatikoki kalkulatzen ditu neurketarako beharrezkoak diren zelula, analito, buffer eta beste soluzio batzuen kantitate zehatzak, prestaketa-prozesua erraztuz.
2. Bufferren, analitoen eta zelulen prestaketa: Diseinu esperimentala amaitu ondoren, beharrezko materialak heliOSek emandako zehaztapenen arabera prestatzen dira. Bufferrak, analitoak eta zelulak tresnaren auto-kargagailuetan kargatzen dira.ampler.
3. Neurketa eta datuen azterketa: Sistemak denbora errealeko interakzio-neurketa automatizatuen programatutako seriea egiten du, erabiltzailearen esku-hartze gehigarririk behar izan gabe. Datuak neurketa martxan dagoen bitartean azter daitezke emaitzen berehalako informazioa lortzeko.

sciIC saiakuntzak heliOS-en

Datuak sortzeko analisiak egiteaz gain, softwareak txipak probatzeko, garbitzeko eta tresnen mantentze-lanetarako metodoak ere eskaintzen ditu.

1. taula. Datuak sortzeko egiaztatutako analisiak

sciC Zinetika	Zelulen zinetika osoa neurtzen du, 1 eta 5 kontzentrazio artean erregula daitekeen analitoen asoziazioarekin, eta ondoren disoziazio bakarra egiten du kontzentrazio altuenaren ondoren. Kanal berdea edo gorria. Analitoen proba soilik egiteko aukera dauka.
sciC Zinetika – Kolore Bikoitza	Zelulen zinetika osoa neurtzen du, 1 eta 5 kontzentrazio artean erregula daitekeen analitoen asoziazioarekin, eta ondoren disoziazio bakarra egiten du kontzentrazio altuenaren ondoren. Kanal berdea eta gorria aldi berean gaituta. Analitoa bakarrik probatzeko aukera dauka.
sciIC Disoziazioa – Kolore Bikoitza	Analito baten disoziazioa neurtzen du kanal berde eta/edo gorria duen fluoreszentziaz markatutako analito batekin aldez aurretik inkubatu diren zeluletatik.

Prestaketak eta saiakuntzak garatzea scIC neurketarako

scIC neurketa bat ezarri aurretik kontuan hartu beharreko puntu batzuk daude

• Analitoen kontzentrazioa, etiketatze maila, propietateak eta kalitatea.
• Normalizazio-soluzioa eta kitzikapen-ahalmena.
• Zelulen kalitatea eta manipulazioa.

Analitoen kontzentrazioa eta etiketatze maila

• Neurketa zinetikoaren praktika estandarrei jarraituz, analitoaren kontzentrazio molarren tartea hautatzea gomendatzen dugu espero den oreka-disoziazio konstantearen (Kd) 0.1x eta 10x artekoa kontzentrazio-zinetika anitzekoetarako. Kontzentrazio bakarreko zinetiketarako edo disoziazio-neurketetarako, analitoaren kontzentrazioa espero den Kd-aren 1x eta 10x artekoa izan behar da. Beharrezko analitoaren bolumena, 10 minutuko asoziazio-denborarako kalkulatua, 25 µL/min-ko fluxu-abiadurarekin, gutxi gorabehera 300 µL da.
• Analito baten Markaketa Gradua (DOL) idealki 1 izan beharko litzateke, nahiz eta 2 edo 3ko DOL balioak onargarriak izan. Hala ere, kontuan izan analito batean etiketa kopuru handiagoak bere lotura-propietateetan eragina izan dezakeela, eta agregazio edo lotura ez-espezifikoen probabilitatea handitu dezakeela. DOL optimoa lortzeko, jarraitu heliXcyto erreaktiboen lerroko koloratzaile gorria edo berdea duten Markaketa Kitekin batera emandako protokoloa.
  Normalizazioa
• Normalizazioa datuak sortzeko metodo guztietan lehen urratsa da. Neurketa-puntu bakoitzerako detektagailu bereiziak erabiltzeak eragindako seinale-aldaketa txikiak konpentsatzen ditu. Urrats honetan, erabiltzaileak definitutako kontzentrazioko koloratzaile fluoreszente bat injektatzen da analisiaren hasieran.
• Normalizazio Soluzioaren kontzentrazioa kalkulatzeko, neurketan erabilitako analito fluoreszenteki markatutako kontzentrazio handiena analitoaren Markatze Graduarekin (DOL) biderkatzen da. Kontzentrazio honek neurketan zehar aplikatzen den LED kitzikapen potentzia gidatzen du. Helburua Normalizazio Soluzioaren gailurrak gutxi gorabehera fluoreszentzia seinale berdina lortzea da. amplititudea analitoen kontzentrazio altuena bezala.
• Kontsultatu gida nagusian dagoen Normalizazio-soluzioaren kontzentrazio-taula hasierako balioak ezartzeko. Kontuan izan taulak hasierako ezarpenak gidatzen dituela, baina LED kitzikapen-potentzia gehiago doi daitekeela saiakuntzaren garapenean zehar.

Zelulen Kalitatea eta Prestaketa

• Zelulen bideragarritasuna % 95etik gorakoa izan behar da, eta zelulak, oro har, egoera onean egon behar dira. Zelula itsasgarrientzat, % 50-70 konfluentzia duten zelulekin lan egitea gomendatzen dugu.
• Zelulen esekidurarako, hazkunde-fase logaritmiko ertainean biltzea gomendatzen dugu. 50 µl zelula-esekidura behar dira 1E+06 zelula/mL-tan exekuzio bakoitzeko.

Zelulen esekidura bilketa

1. Zentrifugatu gutxi gorabehera 2E+06 zelula 300 g-tan 7 minutuz zelula-kultura-inguruneak kentzeko. Bota gainnadantea.
2. Garbitu zelulak behin, zelula-pelleta gutxi gorabehera 1 mL DPBS-tan berriro esekituz. Zentrifugatu esekidura 400 g-tan 5 minutuz zelula bizidunak pelletatzeko. Kontu handiz bota gainnatzailea zatiak eta ingurunea kentzeko.
3. Suspentsio astiro-astiro jarri 1 mL DPBS-tan, esekidura zelula-iragazki baten gainean jarri eta grabitate-fluxuaren bidez iragazi.
4. Neurtu iragazitako suspentsioaren zelulen kontzentrazioa eta egokitu 1E+06 zelula/ml-ra.
   • AHOLKUA: Zelula batzuek multzoak osatzeko joera dute. Multzoak astiro-astiro berriro eseki eta iragazi urrats bat egin lehen zentrifugazio urratsaren aurretik.
   • Erabili pipeta puntak zabal-zabal zelulen esekidurak maneiatzen dituzunean, transferentzian edo beresekiduran zehar ebakidura-indar handiak saihesteko.

Zelula itsasgarrien bilketa

1. Garbitu zelulak DPBS esterilarekin.
2. Banatu zelulak hazkuntza-matrazetik nahiago duzun disoziazio-erreaktiboarekin (adibidez, TrypLE).
3. Zelula disoziatuak nahiago den bolumenera bersuspenditu eta 30 nm-ko zelula-iragazki batekin iragazi.
4. Aukeran, gehitu EDTA zelula oso itsasgarrien kasuan (5 mM-ko azken kontzentrazioa).
5. Zentrifugatu zelulak 300 g-tan 7 minutuz zelula-kultura-inguruneak kentzeko. Bota gainnadantea.
6. Zelulak berriro eseki itzazu DPBS 1 mL-tan.
7. Neurtu zelulen kontzentrazioa eta egokitu 1E+06 zelula/ml-ra.
   • AHOLKUA: Zelula-inguruneak DPBSrekin 1:4 diluituta erabil daitezke zelulei mantenugaiak gehitzeko.ampZelula sentikorren edo analisi-lan-fluxu luzeen kasuan les.

Zelulen finkapena

1. Zentrifugatu 10E+06 zelula arte 300 g-tan 7 minutuz zelula-kultura-inguruneak kentzeko. Bota gainnadantea.
2. Zelula-pelleta berriro eseki 1 mL PBS-tan, zentrifugatu eta gainnadantea bota.
3. Zelula-pelleta berriro eseki 500 µL PBS/%2 PFA-tan (62.5 µL %16ko PFA disoluzioa + 437.5 µL PBS).
4. Inkubatu zelulak giro-tenperaturan 10 minutuz (tarteka astinduz).
5. Gehitu 500 µL PBS eta zentrifugatu esekidura 400 g-tan 5 minutuz PFA kentzeko.
6. Bota gaindikoa.
7. Zelulak berriro eseki 1 mL PBS-tan, iragazi 30 µm-ko zelula-iragazki batetik, zentrifugatu (400 g, 5 min) eta bota gainnadantea.
8. Zelulak berriro eseki PBS 1 mL ingurutan (aukerakoa: 5E+06 zelula/mL-ko azken kontzentraziora egokitu).
9. Gorde zelula finkoak 2-8 °C-tan, eta erabili hilabeteko epean.
   • Zelula gehiago konpondu behar badira, handitu kopuru guztiak horren arabera.
   • OHARRA: Zelulak biltzean zentrifugazio-abiadura zelula motaren arabera egokitu daiteke, zelulak sentikorrak badira eta g-indar txikiagoak erabiltzen badira normalean.
   • PFAren kontzentrazioa % 0.5 eta % 4 artean alda daiteke.

scIC analisi konfigurazioa

Hurrengo scIC analisiak analisiak garatzean sartu beharko lirateke eta geroago errepikatu ahal izango dira analisi-lan-fluxuetan.

Saiakuntzaren garapen-lan-fluxua 3 urrats bereizitan banatzen da:

1. Zito-txiparen proba
2. Analitoen proba bakarrik
3. Zinetika-analisia

Zito-txiparen proba

• Txip berri baten kalitatea ebaluatu behar da zito-txipa neurketa batean erabili aurretik. Hasi zito-txiparen proba bat bereizita eginez. Ikusi gida nagusiko Helix zito-txiparen kapitulua txiparen proba bat nola konfiguratu eta ebaluatu jakiteko.

Analitoen Bakarrik Proba

• scIC analisi baten garapena Analito Bakarrik Proba batekin hasten da, eta horrek fluoreszentziaz markatutako analitoen portaera ebaluatzen du zelularik gabeko txiparen gainazal fresko batean.
• Proba hau aldian-aldian errepika daiteke etiketatutako analitoen egonkortasuna ebaluatzeko. scIC Analito Bakarrik Proba Zinetikako analisietan konfigura daiteke Zelula ezarpenetan Analito bakarrik kontrol-laukia gaituta.
• Analitoen kalitatea ebaluatzeko, erabilitako kontzentrazio handiena nahikoa da eta analisian asoziazio guztiak desgaituz konfigura daiteke, bat izan ezik.

Zinetikako saiakuntzaren lan-fluxuaren konfigurazioa

• Zinetika-analisia normalean datuak sortzeko analisiak eta mantentze-elementuak dituen lan-fluxu automatizatu baten barruan erabiltzen da. Analitoak kalitate-kontroleko analito-proba gainditu duenean, zeluletan neurketa batean erabil daiteke.
• Zinetika-tasak fidagarritasunez kuantifikatzeko, asoziazioan zeharreko seinale-erantzuna kontzentrazioaren menpekoa izan behar da, analitoen kontzentrazio handiagoekin handituz.
• Kontzentrazio altuenak goi-ordoki batera iritsi beharko luke, eta horrek lotura-egoera egonkorra lortu dela adierazten du. Disoziazioa nahikoa denboraz egin behar da lotutako analitoaren zati esanguratsu bat (% 5 baino gehiago) askatzeko, kurbaren doikuntza fidagarria ahalbidetzeko.
• Erabili analisi-baldintzetako parametro lehenetsiak abiapuntu gisa eta egokitu gehiago emaitzen arabera.

Examp1. Gomendatutako analisi-lan-fluxua

Saiakuntza-lan-fluxuak erabiltzaileei neurketa- eta mantentze-metodoak ilaran jartzeko aukera ematen die beren esperimentu-behar espezifikoen arabera.

Saiakuntza-lan-fluxu batek urrats hauek izan ditzake adierazitako ordenan:

1. Prime (Mantentze-txipa)
2. scIC zinetika (A zelulak, A analitoa, zito txipa)
3. Sistemaren garbiketa (mantentze-txipa)
4. scIC zinetika (B zelulak, A analitoa, zito txipa)
5. Sistemaren garbiketa (mantentze-txipa)
6. Analitoak bakarrik konfiguratutako scIC zinetika (Analito A, Zito txipa)
   • Leheneratze eta Sistemaren Garbiketa urratsak Mantentze Txip batean egiten dira. Sistemaren Garbiketa bat barne hartzen da beste zelula-lerro batera aldatzean eta Analito Bakarrik Proba egin aurretik, lan-fluxuaren amaieran.
   • Xehetasun gehiago lortzeko, jo ezazu gida nagusiko Cyto sistemaren garbiketari buruzko atalera.
   • Zelulen zinetika-analisiak ilaran jartzean, kontuan hartu zelulen bideragarritasuna, zelula-lerroaren araberakoa baita.
   • Zelula-lerro sentikorretarako, gomendatzen da analisi-fluxu bakoitzeko 1-2 analisi egitea. Zelula-lerro erresilienteagoetarako, analisi gehigarriak ilaran jar daitezke.
   • OHARRA: Saiakuntza gehigarrietarako, prestatu zelula-soluzioa ontzi bereizietan, zelulak modu ezberdinean izendatuz.
   • Ziurtatu erreaktibo guztiak freskoak direla eta 0.22 µm-ko iragazki batetik iragazi direla. Azkenik, jarri prestatutako erreaktiboak tresnan heliOS-ek argibideen arabera.
   • Saiakuntza hasteko, “Run” gezi urdinaren ikonoa sakatu eta Saiakuntza Hasteko Morroian agertzen diren urratsak jarraituz has daiteke.
   • Behin exekuzioa hasita, gailuak modu independentean funtzionatzen du analisi-lan-fluxu osoa amaitu arte.

scIC esperimentuen analisia

scIC analisi-lan-fluxua

• scIC datuak biosentsore estandarren datuetatik desberdinak izan daitezke heliXcyto txiparen gainazalean harrapatutako zeluletan gertatzen diren gertaeren konplexutasun naturalagatik, eta horrek sentsogramen irregulartasunak sor ditzake.
• Beraz, neurketa-urrats bakoitzean hartutako irudien eta analisi automatizatuaren hasierako orrialdean sortutako sentsogramen kalitate-kontrola azpimarratzen da.
• Gainera, heliOS-ek tresnak eskaintzen ditu scIC datuen eskuzko analisietan sentsorgramen irregulartasunak konpontzeko.

sciC datuen analisi prozesua:

1. Irudien ikuskapena:
   • Neurketa osoan zehar hartutako irudi guztiak aztertu (esperimentuaren leihoko Irudiak fitxa).
   • Zenbat zelula mantendu ziren tranpetan egonkor neurketa osoan zehar?
   • Zein da zelulen egoera? Egiaztatu granularitatea eta zelulen osotasuna.
   • Tranpak garbi al daude birsorkuntza-urratsaren ondoren?
2. Datu gordinaren egiaztapena:
   • Aztertu 1. erreferentzia-puntuaren eta 2. neurketa-puntuaren datu gordinak
   • Normalizazio-gauaren seinalea datu gordinaren seinalerik altuenaren antzekoa edo handiagoa izan behar da.
   • Seinalea oinarrizko mailara itzultzen al da bi puntuetan, edo lotura ez-espezifikoaren ebidentziarik ba al dago?
3. Datu Normalizatuen Egiaztapena:
   • 1. eta 2. puntuetako injekzio-jauziak behar bezala gainjartzen al dira?
4. Erreferentziatutako datuen egiaztapena:
   • Birsorkuntza-urratsak seinalea oinarrizko mailara itzultzen al du? Hala ez bada, egiaztatu ea zelulak edo hondakinak dauden tranpetan birsorkuntzaren ondoren berriro erabiliz.viewirudiak egitea.
   • Ba al dago punturik, muturreko baliorik edo bestelako irregulartasunik erreferentziatutako kurbetan? Hala bada, berriroview irudiak kausa potentzialak identifikatzeko eta eskuzko doikuntzak kontuan hartzeko.
5. Datuen egokitasun egiaztapena:
   • Ikusmen-kalitatearen ebaluazioa egitea
   • Doikuntzak kurben portaera zehatz-mehatz deskribatzen al du, ala doikuntza-lerroak sentsograma zeharkatzen al du?
   • Egokitzapenak datuen kurbadura behar bezala deskribatzen al du?
   • da amperreferentziazko datuekin koherentea da maila?

scIC Datuen Analisi Automatizatua

• scIC analisi automatizatuak datu gordinak kalitate-kontrol grafikoetan eta doitutako datuetan prozesatzen ditu klik gutxitan.
  1. Ireki scIC esperimentu bat hautatutako esperimentuan esperimentuen zerrendan klik bikoitza eginez.
  2. Egin klik esperimentuaren fitxaren behealdean dagoen Aztertu botoi urdin handian.
  3. Esperimentuaren lan-fluxutik, hautatu aztertu nahi duzun saiakuntza.
  4. Aukeratu Kinetics scIC eskuragarri dauden analisi motak eta egin klik Hurrengoa botoian.
     • OHARRA: Esperimentua martxan badago oraindik, osatutako analisiak bakarrik agertuko dira zerrendan. Behin analisi bat hautatuta, hurrengo leihoak erabilitako metodo/analisi mota espezifiko guztiak erakutsiko ditu.
  5. Beharrezkoa bada, konfiguratu analisia hurrengo leihoan. Egokitzapen eredu lehenetsia "Zinetika - Amaierako maila librea" da, "Behartu egokitzapenaren amaierako maila zerora" kontrol-laukia aktibatuta. Desbideratu eredu honetatik biologiak edo datuek deskribapen konplexuagoa behar badute bakarrik.
  6. Konfigurazioa amaitutakoan, egin klik Aztertu aukeran eratorritako argazki guztiak, sentsograma gordinak eta prozesatutakoak eta balio zinetikoak ikusteko.
• S-ren berezko konplexutasunagatikampsciIC analisietarako erabiltzen direnean, emaitza diren sentsoriogramek irregulartasunak izan ditzakete.
• Honi aurre egiteko, irudien eta sentsogramen kalitate-kontrola azpimarratzen da analisi automatizatuan.
• Eskuzko zuzenketak edo analisi sakonagoa behar bada, artefaktuak zuzentzeko tresnak eskuzko analisietarako Scratchpad-en daude.

heliXcyto Mantentze-lanak eta deskontaminazioa

• heliXcyto-ren mantentze-lanak ezinbestekoak dira tresnaren errendimendu eta iraupen optimoa bermatzeko. Mantentze-lan erregularrak garbiketa-prozedurak barne hartzen ditu, kutsadura saihesteko eta sistemaren osotasuna mantentzeko, emaitza zehatzak eta funtzionamendu leuna ahalbidetuz. Arreta etengabea funtsezkoa da tresnaren fidagarritasunerako eta esperimentu-emaitzen kalitaterako.
  heliXcyto-ren mantentze-lanak bi prozedura nagusi ditu: Zito Sistemaren Garbiketa, zuzenean analisi-lan-fluxu batean integra daitekeena, eta Garbiketa eta Loa, tresna erabili aurretik mantentzeko errutina bereizi gisa egiten dena, gau osoko neurketa luzeago baten ondoren edo 2 egun baino gehiago erabili ez denean.
• Bai Sistemaren Garbiketak bai Garbitu eta Lo egiteko moduek heliX® Mantentze Txip bat behar dute txiparen erretiluan.

Garbiketa eta lo egiteko errutina

• Garbitu eta lo egin errutina gailua garbitzeko eta itzaltzeko/biltegiratzeko da. Metodoak heliX® gailuaren hodi fluidikoak lehenik ur ultrapuroarekin eta gero % 70eko etanolarekin garbitzen ditu. Azkenik, hodi guztiak airez husten dira.
• Garbiketa-prozedura hau guztiz automatikoa da eta gutxi gorabehera 40 minutu irauten du. Prozeduran zehar, etanola ur-botilan isurtzen da, beraz, botilaren edukia gero bota egin behar da.
• Garbitu eta lo egin ondoren, tresna lo moduan sartzen da eta ezin da erabili Esnatu eta leheneratze bat egin arte. HeliX® mantentze-txipa behar da bi exekuzioetarako.
• GARRANTZITSUA: Hodien kutsadura saihesteko, ziurtatu ur botilaren edukia (ura/etanol nahasketa) botatzen duzula eta hondakin-ontzia husten duzula garbiketa-prozeduraren ondoren.

Itzaltzea eta epe luzeko biltegiratzea

• Denbora luzez erabili gabe bazaude, kendu ura eta etanola dituen botila Clean & Lo prozeduraren ondoren buffer erretilutik eta utzi hodia airearen eraginpean.
• Kendu heliX® Mantentze Txipa ere, eta gorde jatorrizko poltsan. Horrela, atzeranzko fluxua eta kutsadura saihestuko dira. Itzali gailua.

Zitosistemaren garbiketa

• heliXcyto System Wash-ek mikrofluidoen sistema sakonki garbitzen du 3. garbiketa-soluzioa (CS3) erabiliz, 45 minutu ingurutan. CS3 bi segundotan jasotzen da.tagLehenengo orratza eta sampbegizta betetzen eta inkubatzen dira kutsatzaileak kentzeko.
• OHARRA: Egin Cyto System Wash gutxienez egunero gailua erabiltzen ari zarenean. Gomendatzen dugu Cyto System Wash metodoa analisi-fluxu bati gehitzea analisi bakoitzaren ondoren (zelula-lerro berri batera aldatzean edo...).ampkalitatea ez bada egokiena) edo analisi-lan-fluxu baten amaierara arte. Mantentze-txipa aldatu gehienez 50 zito-sistema garbiketa egin ondoren, txiparen erretiluan birsorkuntza-zenbaketa gisa agertzen direnak. view Gailuaren kontrolaren.

Harremanetan jarri

• Dynamic Biosensors GmbH
• Perchtinger Str. 8/10
• 81379 Munich
• Alemania
• Bruker Scientific LLC
• 40 Manning Road, Manning Park
• Billerica, MA 01821

AEB

• Eskaeraren informazioa order.biosensors@bruker.com
• Laguntza Teknikoa laguntza.dbs@bruker.com
• www.dynamic-biosensors.com
• Instrumentuak eta txipak Alemanian diseinatu eta fabrikatzen dira.
• ©2025 Dynamic Biosensors GmbH
• Ikerketa erabiltzeko soilik. Ez da diagnostiko klinikoko prozeduran erabiltzeko.

Ohiko galderak

sciC-ren maiz egiten diren galderak

Berrerabili al dezaket heliXcyto txipa?

Bai, heliXcyto txipa berrerabilgarria eta botatzekoa da. Jarraitu garbiketa eta biltegiratze jarraibide egokiak.

Zein da Mantentze-Txiparen helburua?

Mantentze-txipa garbiketa, probak eta mantentze-eragiketetarako erabiltzen da, sistemaren funtzionamendu egokia bermatzeko.

Zenbat aldiz garbitu behar dut gailua?

HeliXcyto-ren sistema fluidikoa garbi mantentzen da Cyto System Wash eta Clean&Sleep metodoekin. Sistema mikrofluidikoa gomendatzen da Cyto System Wash bidez garbitzea Maintenance Chip batean analisi bakoitzaren ondoren (batez ere zelula mota aldatzen denean) edo, beranduenez, analisi-lan-fluxu baten amaieran. Clean&Sleep prozedura aplikatu behar da erabili aurretik, aurreko neurketa luze baten ondoren (adibidez, gaueko esperimentu baten ondoren goizean) edo heliXcyto 2 egun baino gehiagoz erabiliko ez denean itzalita.

Zenbat denbora gorde daitezke RB 1 / ura / CS 1 / CS 3 / Normalizazio-soluzioa disoluzio hauek gailuan?

Oro har, neurketa bakoitzaren aurretik, disoluzio guztiak aztertu behar dira geratzen den bolumena eta uhertasun edo prezipitazio potentziala ikusteko. Kasu horretan, disoluzioa berehala aldatu behar da. Ura eta RB 1 egunero ordezkatu behar dira eta RB 1 iragazi behar da neurketa bakoitzaren aurretik. Normalizazio-disoluzio diluitua 2 egunez jarraian erabil daiteke. Garbiketa-disoluzioak 3 egunez egonkorrak dira gutxi gorabehera.

Zenbat denbora erabil dezaket heliXcyto txipa?

HeliXcyto txiparen iraungitze-data heliOS-eko Gailu ataleko Txip-erretiluaren fitxan egiaztatu daiteke. Iraungitze-dataren ondoren, ez da txiparen osotasuna bermatzen. Hala ere, tranpak egonkor mantentzen diren bitartean, gainazala garbi badago eta fluoreszentzia-atzeko planoa Txip-proban adierazitako muga-mailaren azpitik badago, txipa neurketetarako erabilgarritzat jotzen da. Txiparen kanpoko garbiketa erregularra egitea gomendatzen da txiparen bizitza erabili ondoren (CCK-1-1 Txip Garbiketa kita egitea gomendatzen da txiparen bizitza nabarmen luzatzeko).

Zenbat denbora erabil dezaket mantentze-txipa?

Mantentze-txipa 50 sistema-garbiketa egin ondoren ordezkatu behar da (heliOS-eko Gailuaren kontrol-kontroleko Txip-erretiluaren fitxan birsorkuntza gisa zenbatzen dira).

Zenbatetan egin behar da heliXcyto txiparen proba?

Txip-probak txiparen fluoreszentzia-hondoari, garbitasunari eta osotasunari buruzko informazioa biltzen du esperimentu berri bat hasi aurretik. Txip berri bat erabiltzen denean gutxienez behin egin behar da, baina esperimentu bakoitzaren aurretik edo hasieran egitea gomendatzen da txiparen egoera egiaztatzeko. Horri esker, neurketa-baldintzak egokitu eta sentsore-grametan dauden anomaliak txipera edo gailura eraman daitezke.

Zein da analitoen markatze-kimika?

Gure markatze-kitek NHS-esterren bidez akoplatzen dute koloratzaile fluoreszente gorri edo berde bat, hurrenez hurren, proteina-analitoetako amina primarioekin (adibidez, lisinekin edo N-muturrarekin). Xehetasunak eta arazoak konpontzeko atala aurki daitezke gure heliXcyto Labeling Kit koloratzaile gorriaren (Labeling Kit koloratzaile gorria 2 CY-LK-R2-1) eta heliXcyto Labeling Kit koloratzaile berdearen (Labeling Kit koloratzaile berdea CY-LK-G1-1) eskuliburuetan. webdenda.

Non aurkitu ditzaket heliOS kredentzialak eta lizentziaren informazioa?

Kredentzialak eta lizentziaren informazioa sartzeko prozesua gure heliXcyto gidan deskribatzen da, heliOS instalazioa atalean. webgunea (heliXcyto gida). Zure lizentziaren informazioa scIC karpetan gorde behar da heliXcyto ordenagailuko mahaigainean, gure Aplikazio Espezialistak prestakuntzan zehar sortu zuen karpetan.

Zeintzuk dira heliXcyto-ren kitzikapen/igorpen tarteak?

Gorriz kitzikapena 605-625 nm-koa da, igorpena (detekzioa) 655-685 nm-koa. Berdez kitzikapena 490-510 nm-koa, berdez igorpena 525-575 nm-koa.

Zenbat aldiz neurtu behar dut esperimentu bera fidagarritasun estatistikoa lortzeko?

Batez besteko zinetika-tasa fidagarriak lortzeko, 3-4 aldiz errepikatzea gomendatzen da 3 kontzentrazioko zinetika-neurketak zelula-populazio homogeneo batean. Datu-multzo koherente batean, errepikapenen asoziazio- eta disoziazio-tasak 2-4 aldiz-tarte batean egon behar dira.

Zein da scIC neurketen sentikortasuna?

Helburuaren adierazpenari dagokionez, detekzio-muga baxuena analitoaren etiketaren araberakoa da, baina normalean scIC-k zelula bakoitzeko 1000-10000 molekula bezain gutxitan neur dezake zinetika. Sentikortasuna handitzeko, gutxienez 5 zelula harrapatzea gomendatzen da, eta 5-10eko analitoaren DOL eta LED potentzia orekatu behar dira fluoreszentzia-kopuru maximoak lortzeko.

Zeintzuk dira heliXcyto-ren detekzio-mugak abiadura zinetikoei dagokienez?

Mesedez, jo heliXcyto-ren zehaztapen teknikoetara, heliXcyto gidan aurki daitezkeenak (heliXcyto gida). Disoziazio-konstantea Kd: 10 pM-tik 1 mM-ra. Elkartze-abiaduraren konstantea kon: 1E3-tik 1E7-ra. M-1s-1. Disoziazio-abiaduraren konstantea koff: 1E-6-tik 1 s-1-ra. Informazio zehatza lortzeko, jo gure heliXcyto gidara. webgunea.

Dokumentuak / Baliabideak

BIOSENTSORE dinamikoak heliX cyto Laborategiko analisi sistema guztiz automatizatua [pdfErabiltzailearen eskuliburua heliX cyto Laborategiko Analisi Sistema Guztiz Automatizatua, heliX cyto, Laborategiko Analisi Sistema Guztiz Automatizatua, Laborategiko Analisi Sistema Automatizatua, Laborategiko Analisi Sistema, Analisi Sistema, Sistema

Erreferentziak

• Erabiltzailearen eskuliburua